Immune characterization of a Colombian family cluster with SARS-CoV-2 infection / Caracterización inmunológica de un grupo familiar colombiano con infección por SARS-CoV-2

Abstract | Introduction: Immunological markers have been described during COVID-19 and persist after recovery. These immune markers are associated with clinical features among SARS- CoV-2 infected individuals. Nevertheless, studies reporting a comprehensive analysis of the immune changes occurring during SARS-CoV-2 infection are still limited. Objective: To evaluate the production of proinflammatory cytokines, the antibody response, and the phenotype and function of NK cells and T cells in a Colombian family cluster with SARS-CoV-2 infection. Materials and methods: Proinflammatory cytokines were evaluated by RT-PCR and ELISA. The frequency, phenotype, and function of NK cells (cocultures with K562 cells) and T-cells (stimulated with spike/RdRp peptides) were assessed by flow cytometry. Anti-SARS-CoV-2 antibodies were determined using indirect immunofluorescence and plaque reduction neutralization assay. Results: During COVID-19, we observed a high proinflammatory-cytokine production and a reduced CD56bright-NK cell and cytotoxic response. Compared with healthy controls, infected individuals had a higher frequency of dysfunctional CD8+ T cells CD38+HLA-DR-. During the acute phase, CD8+ T cells stimulated with viral peptides exhibited a monofunctional response characterized by high IL-10 production. However, during recovery, we observed a bifunctional response characterized by the co-expression of CD107a and granzyme B or perforin. Conclusion: Although the proinflammatory response is a hallmark of SARS-CoV-2 infection, other phenotypic and functional alterations in NK cells and CD8+ T cells could be associated with the outcome of COVID-19. However, additional studies are required to understand these alterations and to guide future immunotherapy strategies.

Resumen | Introducción. Se han descrito diferentes marcadores inmunológicos durante la COVID-19, los cuales persisten incluso después de la convalecencia y se asocian con los estadios clínicos de la infección. Sin embargo, aún son pocos los estudios orientados al análisis exhaustivo de las alteraciones del sistema inmunológico en el curso de la infección. Objetivo. Evaluar la producción de citocinas proinflamatorias, la reacción de anticuerpos, y el fenotipo y la función de las células NK y los linfocitos T en una familia colombiana con infección por SARS-CoV-2. Materiales y métodos. Se evaluaron las citocinas proinflamatorias mediante RT-PCR y ELISA; la frecuencia, el fenotipo y la función de las células NK (en cocultivos con células K562) y linfocitos T CD8+ (estimulados con péptidos spike/RdRp) mediante citometría de flujo, y los anticuerpos anti-SARS-CoV-2, mediante inmunofluorescencia indirecta y prueba de neutralización por reducción de placa. Resultados. Durante la COVID-19 hubo una producción elevada de citocinas proinflamatorias, con disminución de las células NK CD56 bright y reacción citotóxica. Comparados con los controles sanos, los individuos infectados presentaron con gran frecuencia linfocitos T CD8+ disfuncionales CD38+HLA-DR-. Además, en los linfocitos T CD8+ estimulados con péptidos virales, predominó una reacción monofuncional con gran producción de IL-10 durante la fase aguda y una reacción bifuncional caracterizada por la coexpresión de CD107a y granzima B o perforina durante la convalecencia. Conclusión. Aunque la reacción inflamatoria caracteriza la infección por SARS-CoV-2, hay otras alteraciones fenotípicas y funcionales en células NK y linfocitos T CD8+ que podrían asociarse con la progresión de la infección. Se requieren estudios adicionales para entender estas alteraciones y guiar futuras estrategias de inmunoterapia.

Alteración en la expresión de proteínas transportadoras de colesterol y moléculas inmunomoduladoras en pacientes con VIH-1 / Altered expression of cholesterol transport proteins and immunomodulators molecules in HIV-1 infected patients

Debido a que la terapia antirretroviral no logra controlar la activación inmune asociada a la infección por VIH-1, el estudio de moléculas inmunomoduladoras puede proporcionar alternativas para su control. En este sentido, el propósito de este estudio fue evaluar la expresión transcripcional de moléculas asociadas con el metabolismo del colesterol-HDL (C-HDL) y con la respuesta inflamatoria mediada por el inflamasoma NLRP3 en pacientes infectados con VIH-1. En este estudio transversal, se incluyeron 23 pacientes VIH-1 sin tratamiento antirretroviral, con diferentes estadios de progresión, 7 de los cuales son controladores (Carga viral <2000 copias/mL) y 16 progresores (Carga viral >2000 copias/mL), además de 7 controles sanos. En células mononucleares de sangre periférica, se cuantificaron los niveles de la expresión transcripcional de ABCA-1, ABCA-3, Caspasa-5 y TXNIP mediante RT-PCR. Se evaluó la asociación de estos parámetros con variables demográficas y de laboratorio, y se encontró que los individuos VIH-1 progresores mostraron niveles significativamente menores de TXNIP y ABCA-3, sugiriendo que durante la infección por VIH-1 se produce una alteración en la expresión de estas moléculas. Dada la complejidad de las interacciones inmuno-metabólicas durante la infección por VIH-1, se necesitan estudios adicionales para establecer los mecanismos precisos involucrados en estas alteraciones

Because antiretroviral therapy fails to control the immune activation that occurs during HIV-1 infection, the study of immunomodulatory molecules may provide alternative strategies for their control. In this sense, the aim of the research was to evaluate the transcriptional expression of molecules associated with the metabolism of high-density lipoproteins and with the inflammatory response mediated by the NLRP3 inflammasome in patients infected with HIV-1. This is a cross-sectional study, which included 23 HIV-1 patients without antiretroviral treatment, with different stages of progression, 7 of which are controllers (Viral load <2000 copies/mL) and 16 progressors (Viral load >2000 copies/mL), in addition to 7 healthy controls. In peripheral blood mononuclear cells, the levels of transcriptional expression of ABCA-1, ABCA-3, Caspase-5 and TXNIP were quantified by RT-PCR. The association of these parameters with laboratory and demographic variables was evaluated and it was found that HIV-1 progressing individuals showed significantly lower levels of TXNIP and ABCA-3, suggesting that during HIV-1 infection there is an alteration in the expression of these molecules. Given the complexity of the immuno-metabolic interactions during HIV-1 infection, additional studies are needed to establish the precise mechanisms involved in these alterations

Evaluation of Differences in Metabolic and Immunologic Markers and Cardiovascular Risk in HIV-1 Patients / Evaluación de la relación entre marcadores metabólicos, inmunológicos y de riesgo cardiovascular en pacientes con VIH-1 / Avaliação da relação entre marcadores metabólicos, imunológicos e de risco cardiovascular em pacientes com HIV-1

Introduction:hiv infection induces an exacerbated chronic inflammatory response, which triggers met-abolic disorders and cardiovascular diseases; however, there are individuals, known as hiv controllers, who do not have typical progression markers. As cardiovascular risk tests are not accurate on hiv-1 infected patients, the study of metabolic and inflammatory parameters in individuals with different patterns of progression could contribute to the definition of predictors of cardiovascular disease in this population. The aim of this study was to compare hiv controllers and hiv progressors (with and without antiretroviral therapy) as well as with healthy controls in order to explore differences and correlations in metabolic and inflammatory biomarkers associated with cardiovascular risk. Materials and methods:This was a cross-sectional analytical study which included 63 individuals infected with hiv-1 classified as hiv controllers or progressors (with or without antiretroviral therapy), and a healthy control group. The following parameters were determined: carotid intima-media thickness (cimt); cardiovascular risk scores; lipid profile, fasting glucose, high-sensitivity crp, D-dimer, sCD14, sCD163, il-6, and il-18. Data were compared with Anova or Kruskal­Wallis, and correlations were evaluated by the Spearman coef-ficient. Results: While there were no significant differences in Framingham, dad or cimt values, hiv con-trollers exhibited lower triglycerides levels when compared with hiv progressors. No differences were observed in markers, such as high-sensitivity crp, il-6, il-18, and sCD163, among the groups. The median hdl value was higher in hiv progressors on antiretroviral therapy, and cimt in hiv controllers was nega-tively correlated with sCD14. Conclusion:hiv controllers have a different cardiovascular profile than hivprogressors according to their values in metabolic and immunological biomarkers

Introducción: la infección por vih-1 induce una respuesta inflamatoria crónica exacerbada que desencadena alteraciones metabólicas y cardiovasculares; sin embargo, algunos individuos "controladores" no presentan los marcadores de progresión típicos. Dado que las pruebas que evaluan el riesgo cardiovascular carecen de precisión en pacientes con vih-1, el estudio de parámetros inflamatorios en individuos con diferente progresión podría aportar a la definición de predictores de enfermedad cardiovascular en esta población. El objetivo es explorar diferencias y correlaciones en biomarcadores metabólicos e inflamatorios asociados con riesgo cardiovascular, comparando individuos controladores y progresores con y sin terapia antiviral. Materiales y métodos: estudio analítico transversal con 63 individuos infectados por vih-1, clasificados en controladores y progresores (con terapia antiviral y sin esta), y controles sanos. Se midió el grosor de la íntima media carotidea (cimt), puntajes de riesgo cardiovascular y cuantificación de perfil lipídico, glucemia en ayunas, pcr ultrasensible, dímero D, sCD14, sCD163, il-6 e il-18. Se realizó comparación por Anova o Kruskal-Wallis y correlación por coeficiente de Spearman. Resultados: no hubo diferencias significativas en índices de Framingham, dad o cimt, pero los individuos controladores presen-taron menores valores de triglicéridos, comparados con los progresores. No se observaron diferencias en pcr ultrasensible, il-6, il-18, y sCD163, entre los grupos estudiados. La mediana del hdl fue mayor en los progresores con terapia antiviral y el cimt en los controladores se correlacionó negativamente con sCD14. Conclusión: los individuos controladores presentan un perfil cardiovascular diferente a los individuos progresores, de acuerdo con los biomarcadores metabólicos e inmunológicos evaluados

Introdução: a infecção pelo hiv-1 induz resposta inflamatória crônica exacerbada, que desencadeia alte-rações metabólicas e doenças cardiovasculares; no entanto, existem indivíduos, chamados controlado-res, que não possuem os marcadores de progressão típicos. Tendo em vista que os testes que avaliam o risco cardiovascular carecem de precisão em pacientes com hiv-1, o estudo de parâmetros metabólicos e inflamatórios em indivíduos com diferentes padrões de progressão pode contribuir para a definição de preditores de doença cardiovascular nessa população. O objetivo é explorar diferenças e correlações em biomarcadores metabólicos e inflamatórios associados ao risco cardiovascular, comparando indiví-duos controladores e progressores submetidos ou não à terapia antiviral. Materiais e métodos: Estudo analítico transversal que incluiu 63 indivíduos infectados pelo hiv-1, classificados como controladores e progressores (com e sem terapia antiviral), além de grupos controle saudáveis. Realizou-se a medição da espessura da íntima média da carótida (cimt), pontuações de risco cardiovascular; e quantificação do perfil lipídico, glicemia em jejum, pcr ultrassensível, dímero d, sCD14, sCD163, il-6 e il-18. A comparação foi feita por Anova ou teste de Kruskal-Wallis e a correlação pelo coeficiente de Spearman. Resultados.Embora não tenha havido diferenças significativas nos índices de Framingham, dad ou cimt, os indivíduos controladores apresentaram valores de triglicerídeos mais baixos, em comparação com os progressores. Não foram observadas diferenças em marcadores como pcr ultrassensível, il-6, il-18 e sCD163, entre os grupos estudados. O hdl médio foi maior em indivíduos progressores em terapia antiviral, e o cimtem indivíduos controladores foi negativamente correlacionado com o sCD14. Conclusão: os indivíduos controladores apresentam um perfil cardiovascular diferente dos indivíduos progressores, de acordo com os biomarcadores metabólicos e imunológicos avaliados

Inflamación y respuesta inmune innata: participación de las lipoproteínas de alta densidad / Inflammation and innate immune response: role of high-density lipoprotein / Inflamação e resposta imune inata: participação das lipoproteínas de altadensidade

RESUMEN Las lipoproteínas de alta densidad (HDL) tienen como función transportar el exceso de colesterol desde los tejidos hacia el hígado, para ser excretado; y de este modo contribuyen al control de las enfermedades cardiovasculares. Además, las HDL pueden modular la respuesta inmune, por sus propiedades anti-inflamatorias, antioxidantes y anti-apoptóticas, entre otras. A nivel celular, las HDL pueden modificar las balsas lipídicas, las cuales son determinantes en la activación de la respuesta inmune frente a patógenos o agentes extraños. En algunas patologías como la sepsis, las HDL participan mediando la eliminación del lipopolisacárido (LPS) a través de su captura y posterior eliminación en el hígado; esto conlleva a una modulación negativa de la expresión del TLR4, principal receptor del LPS. También se ha reportado que las HDL modulan la respuesta inflamatoria a través de la regulación de la activación de la cascada del complemento y la expresión de pentraxina 3. Finalmente, la función y los niveles de las HDL se han encontrado particularmente alterados en algunas patologías infecciosas, ateroesclerosis y sepsis, lo que se ha asociado con el progreso o la severidad de la enfermedad.

SUMMARY The main function of high-density lipoproteins (HDL) is to transport the excess of cholesterol from tissues to the liver, where it is excreted, thus decreasing the risk of atherosclerotic plaques development and cardiovascular diseases establishment. Besides, HDL participates in different processes of the immune response, as its components have anti-inflammatory, anti-oxidative and antiapoptotic activities, among others. At cellular level, these lipoproteins have the ability to modify lipid rafts, critical micro-domains that participate in signaling pathways in response to pathogens. Likewise, it has been reported that HDL have a great impact in sepsis, as they eliminate the excess of LPS in blood and transport it to the liver for its elimination, and downregulate the expression of TLR4, main receptor of this molecule. Also, HDL can modulate humoral innate immune responses through regulating the activation of the complement pathway and the expression of pentraxin 3, resulting in the modulation of inflammatory processes. In fact, it has been reported that in several infectious diseases, atherosclerosis and sepsis, the level and function of HDL are altered, which associates with the progress of the diseases.

RESUMO As lipoproteínas de alta densidade (HDL) têm a fun- ção de transportar o excesso de colesterol desde os tecidos até ofígado para aqui ser excretado e dessa forma contribuem no controlo das doenças cardiovasculares. Além disso, as HDL podemmodular a resposta imune devido as suas propriedades anti-inflamatórias, antioxidantes e antiapopticas, entreoutras. Anívelcelular, asHDLpodemmodificar os rafts lipídicos, que são essências para a ativa- ção da resposta imune contra patógenos ouagentes estranhos. Nalgumas patologias como a septicemia, as HDL participam mediando a eliminação do lipopolissacarídeo (LPS) através da sua captura e posterior eliminação no fígado. Isto leva a uma modulação negativa da expressão de TLR4, orecetor principal do LPS. Também foi reportado que as HDL modulam a resposta inflamatória através da regulação da ativaçãoda cascata do sistema do complemento e a expressão de pentraxina 3. Por último, a função e os níveis das HDL têm sido especialmente encontrados alterados nalgumas doenças infeciosas, em aterosclerose e em septicemia, o qual esta associado aevolução ou a gravidade da doença.

Efecto de la terapia con probióticos/prebióticos sobre la reconstitución del tejido linfoide asociado a la mucosa gastrointestinal durante la infección por el virus de la inmunodeficiencia humana-1 / Effects of prebiotics and probiotics on gastrointestinal tract lymphoid tissue in hiv infected patients

HIV infection induces alterations in almost all immune cell populations, mainly in CD4+ T cells, leading to the development of opportunistic infections. The gut-associated lymphoid tissue (GALT) constitutes the most important site for viral replication, because the main target cells, memory T-cells, reside in this tissue. It is currently known that alterations in GALT are critical during the course of the infection, as HIV-1 induces loss of tissue integrity and promotes translocation of microbial products from the intestinal lumen to the systemic circulation, leading to a persistent immune activation state and immune exhaustion. Although antiretroviral treatment decreases viral load and substantially improves the prognosis of the infection, the alterations in GALT remains, having a great impact on the ability to establish effective immune responses. This emphasizes the importance of developing new therapeutic alternatives that may promote structural and functional integrity of this tissue. In this regard, therapy with probiotics/prebiotics has beneficial effects in GALT, mainly in syndromes characterized by intestinal dysbiosis, including the HIV-1 infection. In these patients, the consumption of probiotics/prebiotics decreased microbial products in plasma and CD4+ T cell activation, increased CD4+ T cell frequency, in particular Th17, and improved the intestinal flora. In this review, the most important findings on the potential impact of the probiotics/prebiotics therapy are discussed.

Antibodies to West Nile virus in equines of Antioquia and Meta, Colombia, 2005-2008 / Anticuerpos contra el virus del Oeste del Nilo en equinos de Antioquia y Meta, Colombia, 2005-2008 / Anticorpos contra o Vírus do Nilo Ocidental em eqüinos da Antioquia e do Meta, Colômbia 2005-2008

West Nile Virus (WNV) is an arthropod-borne agent classified in the Flavivirus genus. Infection has been demonstrated in many vertebrate species including birds, mammals and reptiles. WNV can affect the nervous system of humans, horses and birds causing mild to severe illness and sometimes death. In 1999 WNV was introduced into the Americas causing a small outbreak in New York City. In the following years, the virus spread across North America and later into Central America, the Caribbean and parts of South America. Serological evidence of WNV in Colombia was first documented in 2005 in equines from the Atlantic coast; however clinical cases in humans or animals have not been reported. We extended these studies searching for WNV antibodies in sera of equines of two other provinces in Colombia: Antioquia and El Meta. IgG and IgM antibodies were first determined and reactive sera were processed by plaque reduction neutralization test (PRNT) to confirm the specificity of results. Four horses from Antioquia but none from El Meta tested positive for WNV antibodies. These results suggest that WNV has spread across the Atlantic coast and is now invading the Andean region in Colombia.

El virus del Oeste del Nilo (WNV) es un agente del género Flavivirus transmitido por artrópodos. La infección con WNV ha sido demostrada en muchas especies de aves, mamíferos y reptiles. El WNV puede afectar el sistema nervioso de humanos, caballos y aves causando enfermedad de leve a severa, ocasionando la muerte en algunos casos. En 1999, el virus fue introducido en Norteamérica causando un brote en la ciudad de New York. En los siguientes años, el virus se extendió por Norteamérica, y posteriormente fue encontrado en el Caribe, Centro y Suramérica. El primer reporte de anticuerpos para WNV en Colombia se hizo en 2005, en equinos de la costa Atlántica. En el presente estudio se extendió la búsqueda de anticuerpos a otros dos Departamentos de Colombia: Antioquia y El Meta. Primero se determinó la presencia de anticuerpos IgM e IgG, y los sueros reactivos fueron procesados para anticuerpos neutralizantes por la técnica de reduccion de placas para confirmar los resultados. Cuatro equinos de Antioquia y ninguno de El Meta fueron positivos para anticuerpos anti-WNV. Los resultados sugieren que el WNV está ampliamente distribuido en la costa Atlántica de Colombia y ha iniciado su dispersión por la zona andina.

O vírus do Nilo Ocidental é um agente transmitido por artrópodes e pertence ao género Flavivirus. A infecção tem sido demonstrada em várias espécies de vertebrados incluindo pássaros, mamíferos e répteis. O vírus do Nilo Ocidental pode afectar o sistema nervoso de humanos, eqüinos e pássaros, causando doença de severidade média à grave a qual pode causar a morte em alguns casos. Em 1999, o vírus do Nilo Ocidental foi introduzido no continente americano, causando um surto na cidade de Nova York. Posteriormente, o vírus se disseminou pela América do Norte e mais tarde pela América Central, Caribe e parte da América do Sul. Os primeiros relatos do vírus do Nilo Ocidental na Colômbia surgiram em 2005 afectando eqüinos na costa atlântica. O objectivo desse trabalho foi buscar anticorpos contra o vírus do Nilo Ocidental no soro de equinos de dois estados da Colômbia: Antioquia e Meta. Anticorpos da classe IgG e IgM foram primeiramente determinados e soros reactivos foram analisados pela técnica de neutralização por redução em placa (PRNT) para confirmar a especificidade dos resultados. Quatro equinos provindos da Antioquia apresentaram resultados positivos para anticorpos contra o vírus do Nilo Ocidental; entretanto não foram detectados anticorpos nos animas provindos do Meta. Estes resultados sugerem que o vírus do Nilo Ocidental tem se disseminado através da costa atlântica e está agora invadindo a região andina na Colômbia.

Actividad antiviral in vitro de extractos de Hura crepitans y Codiaeum variegatum en la replicación de herpes virus bovino tipo-1 y virus de estomatitis vesicular / In vitro antiviral activity of extracts from Hura crepitans y Codiaeum variegatum on bovine herpes virus type-1 and vesicular stomatitis virus replication

Hojas de las plantas Hura crepitans y Codiaeum variegatum se recolectaron en la ciudad de Medellín (Colombia), para determinar la actividad biológica (Actividad citotóxica [AC] y antiviral [AAV]) de cuatro extractos de éstas (hexánico, en acetato de etilo, metanólico y acuoso) sobre los virus de Estomatitis Vesicular (VSV) serotipos Indiana y New Jersey y Herpes Virus Bovino tipo-1 cepa Bogotá (BHV-1B). El tamizaje de actividad biológica de los extractos se realizó en monocapas de células BHK-21. Luego los extractos promisorios, pasaron a la fase cuantitativa de AAV por el ensayo de MTT [3-(4,5-dimethylthiazol–2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] para determinar la concentración citotóxica 50 (CC50), la concentración inhibitoria 50 (IC50) y el índice de selectividad (IS). Ninguno de los extractos de las cuatro plantas presentó AAV contra VSV, mientras que los extractos hexánico, en acetato de etilo y metanólico de H. crepitans confirieron resistencia a la infección por BHV-1B con IC50 de 17.41, 7.87 y 2.75 µ g/ml, respectivamente. El extracto con mejor IS (relación entre IC50 y CC50) fue el hexánico de H. crepitans (IS > 17.4). Estos resultados sugieren que pueden existir compuestos en el extracto hexánico de H. crepitans con una actividad promisoria anti BHV-1B. Este estudio es pionero en demostrar actividad antiviral de extractos de plantas de la especie Euphorbiaceae contra BHV-1B.

Leaves from Hura crepitans and Codiaeum variegatum plants were collected in Medellín, Colombia to determine its cytotoxic [CA] and antiviral activity [AVA]. Four extracts were prepared using hexane, ethyl acetate, methanol and water; the antiviral activity was tested against Vesicular Stomatitis Virus (VSV), serotypes Indiana and New Jersey and Bovine Herpes Virus (type 1 Bogotá strain). The preliminary biological activity of each of the eight extracts was determined on BHK-21 cell monolayers using 96 well-plates. Then, promissory extracts were further tested using the MTT [3-(4,5-dimethylthiazol–2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] assay to determine the cytotoxic concentration 50 (CC50), the inhibitory concentration 50 (IC50 ), and the selectivity index (SI). None of the evaluated plants exhibited AVA against VSV, whereas the extracts in hexane, ethyl acetate and methanol from Hura crepitans protected cell monolayer from infection against BHV-Bogotá with IC50 of 17.41, 7.87 and 2.75 µ g/ml respectively. The best IS was hexane of H. crepitans (SI > 17.4). These results suggest that this extract contains antiviral compounds. This research is pioneer demonstrating AVA against BHV-1B in extracts from plants of the Euphorbiaceae family.